使用過液相的小伙伴應(yīng)該都問過這樣的問題吧:不同的實(shí)驗(yàn)應(yīng)該選擇什么規(guī)格的色譜柱?如何提高
資生堂色譜柱的分離?等等,今天就和小編一起看看下面這些問題你都遇到過幾個(gè)?
資生堂色譜柱規(guī)格對分析結(jié)果會(huì)產(chǎn)生何種影響?
色譜柱內(nèi)徑?jīng)Q定載樣量,載樣量與內(nèi)徑的平方成正比;色譜柱長度與塔板數(shù)成正比,與柱壓成正比;粒徑影響渦流擴(kuò)散相,粒徑越小渦流擴(kuò)散相越小,柱效越高,粒徑與柱效近似成反比;粒徑越小,壓力也越大,壓力與粒徑的平方成反比。
填料孔徑對分析對象的分子量有限制,當(dāng)孔徑為分析物尺寸的5倍以上時(shí),分析物才能順利通過孔隙,孔徑處于60~120Å的色譜柱適用于相對分子量小于10000的分析物,孔徑為300Å的資生堂色譜柱可以滿足分子量處于10000以上的大分子化合物分析。
何謂封端?封端的意義是什么?
硅膠表面的硅羥基(Si-OH)密度為8μmol/m2,由于空間位阻的存在,硅烷化鍵合反應(yīng)只能覆蓋50%的硅羥基,超過一半的硅羥基是活性硅羥基。
這些硅羥基與化合物的極性基團(tuán)存在極性相互作用和離子交換作用,為化合物的保留增加了不被期望的作用力,往往會(huì)影響峰形。用短鏈氯硅烷鍵合活性的硅羥基,可以減小甚至消除這種影響,這種操作被稱為封端(Endcap)。
封端處理的意義:
1、抑制了特異性吸附,提高了色譜峰的對稱性,并改善了分離效果;
2、在一定程度上掩蔽了硅膠表面,使其對堿性環(huán)境的耐受性增強(qiáng);
3、通過空間位阻掩蓋了鍵合反應(yīng)形成的Si-O-Si鍵,使其對酸性環(huán)境的耐受性增強(qiáng);可能會(huì)影響對極性樣品的選擇性。