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維生素 A（retinol）、維生素 D（vitamin D2 和 vitamin D3）、維生素E（tocopherol）是機(jī)體維持正常代謝和機(jī)能的所必需的脂溶性維生素。其中維生素 E 有 8 種異構(gòu)體形式，即4 種生育酚（α、β、γ、δ-tocopherols）和 4 種三烯生育酚（α、β、γ、δ-tocotrienols），均具有重要的生物活性，被認(rèn)為是一類主要的抗氧化劑。通常α-生育酚被報(bào)道是活性高的一種維生素E 形式，因此很多文獻(xiàn)報(bào)道的分析方法僅測(cè)定了α-生育酚的含量。近研究表明，其他幾種異構(gòu)體形式也在人體中具有重要的作用，并且γ-生育酚具有抗癌作用。維生素E 異構(gòu)體結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和活性的差異，決定了建立一種準(zhǔn)確可靠的分析方法，來分離和測(cè)定食品基質(zhì)中各個(gè)異構(gòu)體含量，具有重要意義。如何進(jìn)行食品中維生素A、D、E的測(cè)定呢？

新版國(guó)標(biāo)GB5009.82-2016對(duì)維生素E的四種異構(gòu)體的分析提出了要求。而常規(guī)C18色譜柱很難將其實(shí)現(xiàn)基線分離。另外維生素 D 也是嬰幼兒配方食品中一種重要的營(yíng)養(yǎng)素，在用常規(guī)反相C18分析D2 和D3 異構(gòu)體的時(shí)候經(jīng)常遇到分離度差的問題。

本文建立了同時(shí)測(cè)定食品中D和E含量的液相色譜法，可實(shí)現(xiàn)對(duì)維生素E的四種異構(gòu)體和D2和D3兩種異構(gòu)體的分析及準(zhǔn)確定量。

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樣品前處理

取維生素 D2、D3 和E 標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱定，至25 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成濃度分別為 1.0 mg/mL 維生素 D3 和 D2 溶液和 2.06 mg/mL 維生素 E 儲(chǔ)備溶液。

分別精密量取維生素 D3 和 E 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，至 10 mL 棕色量瓶中，配制成混合溶液，再分別精密加入等量的濃度為 10 μg/mL 的維生素 D2 的內(nèi)標(biāo)溶液，甲醇稀釋至刻度，分別得到濃度為：ɑ-VE：2.4μg/ml，ß-VE：2μg/ml,γ-VE:1.6μg/ml、δ-VE:2.4μg/ml, D3: 0.08μg/ml.

儀器方法

四種維生素E異構(gòu)體分析的色譜條件：

方法一

色譜柱：Acclaim C30

4.6×250 mm,5 μm(貨號(hào)：075718)

流動(dòng)相：甲醇-水

流速：0.8mL/min

檢測(cè)器：紫外，296nm

柱溫：20℃

進(jìn)樣量：10μL

儀器：Ultimate 3000

圖1 四種維生素E的實(shí)驗(yàn)圖譜:Acclaim C30

方法二

色譜柱：Accucore PFP

3.0×150 mm,2.6 μm(貨號(hào)：17426-153030)

或 GOLD PFP 4.6×250 mm,5 μm(貨號(hào)：25405-254630)

流動(dòng)相：甲醇-水

流速：0.6mL/min （Accucore PFP）, 1ml/min（GOLD PFP）

檢測(cè)器：紫外，296nm

柱溫：20℃

進(jìn)樣量：10μL

儀器：Ultimate 3000

圖2 四種維生素E的實(shí)驗(yàn)圖譜：Accucore PFP

圖3 四種維生素E的實(shí)驗(yàn)譜圖：GOLD PFP

兩種維生素D異構(gòu)體分析的色譜條件：

色譜柱：Hypersil Green PAH

4.6×150 mm,3 μm(貨號(hào)：31103-154630)

流動(dòng)相：乙腈：甲醇=60:40

流速：1mL/min

檢測(cè)器：紫外，264nm

柱溫：35℃

進(jìn)樣量：10μL

儀器：Ultimate 3000

圖4  兩種維生素D異構(gòu)體的實(shí)驗(yàn)圖譜

結(jié)論

采用賽默飛公司Acclaim C30，Accucore PFP，GOLD PFP及Hypersil Green PAH 色譜柱可按照國(guó)標(biāo)GB 5009.82-2016條件對(duì)維生素ADE進(jìn)行分析，并對(duì)各化合物有較好的保留和分離。